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「蛋白实验」骨头、脂肪、皮肤蛋白提取要点

1. 为了避免提取杂蛋白掺入，在取材时将附着在骨表面的组织剔除干净然后用PBS冲洗3次将表面的血液等杂质冲洗干净。（通常提取后的上清液微微偏红因为含有不同量的血液，建议取材的时候先充分放血。）
2. 因为骨头样本材质较硬且蛋白含量偏少，可以将骨头样本置于研磨铂中加入5ml液氮研磨成偏小的碎片。再将碎片样本装进研磨管加入1大2小的钢珠，置于研磨仪上（70HZ、2min、3次、-20℃）每次研磨间隔2min，使其充分研磨成粉。
3.根据比例加入裂解液4℃静止30min使其充分裂解。因为骨蛋白含量偏低，可适当减少裂解液的添加，以达到提高蛋白样本浓度的目的。
4.将样本置于离心机中（12000rap、2℃、10min）充分离心。之后避免沉淀取上清液测BCA蛋白浓度后分装保存。（有时骨头样本上清液表面会有一层油膜，取上清液时需要用枪头去除掉）
结果展示：

脂肪样本由脂肪细胞组成，周围通常伴有结缔组织和细胞外基质，并含有高水平的脂质。这些成分会干扰蛋白质的提取，特别时脂质的存在，在我们蛋白提取过程中会与蛋白质共沉淀，导致蛋白质样本的产量很低，质量差。
1.提取脂肪样本之前用PBS冲洗一下表面杂质，用干净的厨房纸将表达的PBS擦干用手挤压样本，可以有效去除一部分油方便后续步骤。
2.用手术刀将样本尽量剪碎加入裂解液（脂肪蛋白含量较低，可适当减少裂解液的添加，以达到提高蛋白样本浓度的目的），再转移至研磨管内研磨需要加入适量的钢珠（70HZ、30s、3次、-20℃）每次研磨间隔1分钟，避免研磨过程产热。观察研磨情况，可适当增加研磨次数。
3.研磨完成后，冰上静置15min。然后离心取上清液（12000rap、2℃、20min）。取得上清液表面有一层油膜可用移液枪将表面油膜小心吸取掉。
4.将上清液吸取至过滤柱中，再次离心（12000rap、2℃、2min）。所得上清液即为总蛋白，测定BCA蛋白浓度之后分装保存。
结果展示：
 
皮肤组织由表皮、真皮、和皮下脂肪组成。由于皮肤组织独特的结构，所以研磨匀浆非常困难。
1.用镊子将皮肤组织表皮的毛发清理干净，同时用手术刀将皮下脂肪也尽量剔除干净。
2.称取适量的组织样本（30-50mg）按照1：10加入300-500裂解液（为了提高浓度可适当减少裂解液的比例），用手术刀切成小块（1*1mm），装入研磨管加入1大2小钢珠（70HZ、2min、3次、-20℃）研磨。
3.研磨完成后冰上静置15min，然后离心（12000rap、2℃、10min）取蛋白上清液
4.将上清液吸取至过滤柱中，再次离心（12000rap、2℃、2min）。所得上清液即为总蛋白，测定BCA蛋白浓度之后分装保存。
结果展示：
 

 
 

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